همه چیز درباره محیط کشت شکلات آگار

مقدمه‌ای بر آگار شکلاتی

آگار شکلاتی (CHOC) یا آگار شکلاتی خون دار (CBA) ، یک محیط رشد غیر انتخابی و غنی شده است که برای جداسازی باکتری های بیماری زا استفاده می شود. این یک نوع پلیت آگار خون دار است که حاوی گلبول های قرمز خون دار است که با گرم شدن آرام محیط تا 80 درجه سانتی گراد، گلبول های قرمز آن لیز شده است.

از آگار شکلاتی برای رشد باکتری های تنفسی سخت رشد و دیر رشد مانند Haemophilus influenzae و Neisseria meningitidis استفاده می شود. علاوه بر این ، برخی از این باکتری ها ، به ویژه H. آنفلوانزا ، به فاکتورهای رشدی مانند نیکوتین آمید آدنین دینوکلئوتید (فاکتور V یا NAD) و هِمین (فاکتور X) که در داخل گلبول های قرمز خون هستند ، نیاز دارند.

بنابراین ، پیش نیاز رشد این باکتری ها وجود گلبول های قرمز لیز شده است. گرمایی که به این محیط داده می شود، آنزیم های را نیز غیرفعال می کند که می توانند NAD را تخریب کنند. نام این آگار از رنگ شکلاتی آن گرفته شده است.

واریانت ها

آگار شکلاتی، با افزودن باسیتراسین تبدیل به محیطی انتخابی برای جنس Haemophilus می شود. نوع دیگری از آگار شکلاتی به نام آگار Thayer-Martin شناخته می شود که شامل مجموعه ای از آنتی بیوتیک ها است که آن را برای گونه های Neisseria تبدیل به یک محیط انتخابی می کند.

ترکیبات محیط شکلات آگار

ترکیبات	Gr /L
کازئین/ بافت حیوانی هضم شده	15.0g
نشاسته ذرت	1.0g
سدیم کلرید	5.0g
دی پتاسیم فسفات	4.0g
مونوپتاسیم فسفات	1.0g
محلول هموگلوبین	۲%
کوآنزیم های غنی کننده	10.0ml
آگار	10.0g

pH نهایی 7.2 ± 0.2 (در دمای 25 درجه سانتیگراد)

نحوه تهیه محیط شکلات آگار

تهیه محلول هموگلوبین

هموگلوبین را به آب مقطر اضافه کنید و حجم آن را به ۵۰۰ میلی لیتر برسانید. آن را کاملاً مخلوط کرده و به مدت ۱۵ دقیقه در فشار ۱۵ پوند در ۲۱ درجه سانتیگراد اتوکلاو کنید. و به دمای ۴۵ درجه تا ۵۰ درجه سانتیگراد برسانید تا خنک شوید.

آماده سازی محیط

به جز محلول هموگلوبین ، سایر اجزا را به آب مقطر اضافه کنید و حجم آن را به ۵۰۰ میلی لیتر برسانید. مواد را کاملاً مخلوط کنید. به آرامی حرارت دهید تا جوش بیاید. در فشار ۱۵ پوند در دمای ۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید و به دمای ۴۵ درجه تا ۵۰ درجه سانتیگراد برسانید تا خنک شوید.

۵۰۰ میلی لیتر محلول استریل هموگلوبین را اضافه کرده و کاملاً مخلوط کنید. در ظروف استریل پتری ریخته و یا در لوله های استریل توزیع کنید.

نکات محیط شکلات آگار

شکلات آگار پایه با افزودن مکمل ها، محیط مناسبی برای باکتری های سخت رشد است. کازئین و بافت حیوانی هضم شده، مواد مغذی نیتروژنی ، اسیدهای آمینه و سایر عناصر ضروری برای رشد ارگانیسم ها را فراهم می کنند. از آنجا که گونه های نیسریا به مواد سمی مانند اسیدهای چرب بسیار حساس هستند ، بنابراین افزودن نشاسته ذرت به خنثی سازی متابولیت های سمی احتمالی کمک می کند ، فسفات پتاسیم به حفظ یکنواخت PH در طول رشد کمک می کند.

سدیم کلراید تعادل اسمزی را حفظ می کند و در نتیجه یکپارچگی سلول ها را حفظ می کند. شکلات آگار همچنین به عنوان گونه ای از محیط های آگار خون دار در نظر گرفته می شود که شامل گلبول های قرمز خون لیز شده است که با گرم شدن آهسته محیط تا ۸۰ درجه سانتی گراد لیز شده است.

برخی تغییرات نیز می توانند برای رشد ارگانیسم خاص در این محیط ایجاد شوند. Thayer-Martin Media یک آگار شکلاتی است که با وانکومایسین ، نیستاتین و کولیستین برای مهار فلور طبیعی از جمله Neisseria غیر بیماری زا تهیه شده است. این محیط برای جداسازی انتخابی N. gonorrhoeae و N. meningitidis همراه است. شکلات آگار همراه با باسیتراسین یک محیط انتخابی است که برای جداسازی اولیه H. آنفلوانزا از نمونه های حاوی فلور مخلوط باکتری ها و قارچ ها استفاده می شود.