محیط کشت Nitrate Agar چیست
مطابق با فرمول منتشر شده در Pure Culture Study of Bacteria of the Society تهیه می شود به گفته باکتری شناس آمریکایی توانایی کاهش نیترات برای جدا کردن و شناسایی انواع مختلف باکتریها به ویژه خانواده Enterobacteriaceae ارزشمند است و غیر تخمیر کننده ها و سایر باسیل های گرم منفی از سایرقسمتهای متفاوت این محیط هستند. بعضی از قسمتها این محیط قادربه کاهش نیترات ها نیستندو این قسمتها همچنین قابل اصلاح نیستندکه این به معنای کاهشنیترات به گاز نیتروژن هستند. برای باسیلهای گرم منفی تخمیر گلوکزو تولید گاز نیتروژن از نیترات یک آزمون دیفرانسیل مهم است نیترات پتاسیم در محیط به عنوان یک بستر برای تعیین کاهش نیترات توسط باکتری ها عمل می کند. و به باکتری های خاصی تبدیل می شوند گاز نیترات به نیتریت آمونیاک یا گاز نیتروژن معروف است. وجود نیتریت ها را می توان با افزودن 0.5 میلی لیترسولفانیلیک اسید (R015) و محلول آلفا-نفتیلامین (R009)تشخیص داد ایجاد رنگ بنفش قرمز به دلیل تشکیل یک رنگ قرمز دیازونیوم یعنی p-sulphobenzene-azo-a-nafthylamine نشان دهنده کاهش نیترات به نیتریت است. اگر هیچ رنگی بوجود نیامد این بدان معنی است که یا نیترات کاهش نمی یابد یا کاهش بیشتر آمونیاک یا گاز نیتروژن اتفاق افتاده است. این می تواند با افزودن یک مخلوط گرد و غبار روی به لوله تأیید شود. روی باعث کاهش رنگ نیترات به نیتریت و در نتیجه ایجاد رنگ قرمز مورد نظرمی شود. رنگ قرمز نشان می دهد که نیترات هنوز وجود دارد و قبلاً کاهش نیافته است. عدم وجود رنگ قرمز پس از افزودن گرد و غبار روی نشان می دهد که هیچ گونه نیتراتی وجود ندارد و بنابراین نیترات بیشتر از نیتریت کاهش می یابد.این همان آزمون کاهش نیترات است یا وجود یک محصول نهایی کاتابولیک یا عدم وجود نیترات در محیط اثبات شده است. اعضای Enterobacteriaceae به طور مشخص نیترات را به نیتریت کاهش می دهند که با اسید سولفانیلیک و N ، Ndimethyl-1- nafthylamine واکنش نشان می دهد و رنگ قرمز تولید می کند. این واکنش به عنوان واکنش Griess شناخته می شود. اگر ارگانیسم به سرعت رشد کند و نیترات را به سرعت کاهش می دهد آزمایش باید بعد از یک دوره ترکیب کردن زودهنگام انجام شود زیرا نیتریت ممکن است نسبت به نیتروژن بیشترکاهش یابد. برای آزمایش: از هر معرف چند قطره به عنوان مثال اسید سولفانیلیک (R015) و محلول نفتیلامین (R009) به لوله اضافه کنید
حاوی لوله را مورد آزمایش قرار دهید.واگر رنگ قرمز یا صورتیبوجود آمد این نشان دهنده کاهش نیترات است. یک لوله آزمایش (بدون تلقیح) باید همچنین آزمایش شود.
ترکیبات محیط کشت نیترات آگار
طرز تهیه محیط کشت Nitrate Agar
- 21 گرم از پودر محیط کشت Nitrate Agar را در 1000 میلی لیتر آب تصفیه شده یا مقطر حل کنید.
- محلول را داغ کنید تا محیط کاملا حل شود.
- و با اتوکلاو در فشار 15 پوند121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه عقیم شوید.
- توزیع در لوله ها و اجازه دهید تا لوله ها در حالت مورب تا 45-50 درجه سانتیگراد خنک شوند.
کاربرد محیط کشت نیترات آگار
محیط کشت Nitrate Agar که برای تشخیص میزان کاهش نیترات توسط باکتریها توصیه می شود
ویژگی محیط کشت نیترات براث
- تشخیص سریع باکتری های گروه انتروباکتریاسه با کاهش نیترات محیط
کاربرد محیط کشت نیترات براث
- شناسایی باکتری های گروه انتروباکتریاسه
- شناسایی و تفکیک باکتری های تخمیر کننده نیترات با گروهی از باکتری های گرم منفی