مقدمه‌ای از تست کواگولاز
از تست کواگولاز برای تمایز استافیلوکوکوس اورئوس (کوآگولاز مثبت) از استافیلوکوک های کوآگولاز منفی استفاده می شود. کوآگولاز آنزیمی است که توسط استافیلوکوکوس اورئوس تولید می شود و فیبرینوژن (محلول) موجود در پلاسما را به فیبرین (نامحلول) تبدیل می کند. استافیلوکوکوس اورئوس دو شکل کوآگولاز ، متصل و آزاد تولید می کند.
- تست اسلایدی کوآگولاز برای تشخیص کوآگولاز متصل انجام می شود.
- تست کواگولاز لوله ای برای تشخیص کوآگولاز آزاد انجام می شود.
تست کواگولاز اسلایدی
فاکتور منعقد کننده، مستقیماً فیبرینوژن را به فیبرین تبدیل می کند و باعث آگلوتیناسیون می شود.
سوسپانسیونی غلیظ از ارگانیسم مورد نظر بر روی در لام شیشه ای ساخته می شود و با قطره پلاسما مخلوط می شود.
آگلوتیناسیو مشاهده شده، حاکی از نتیجه ی مثبت است و نشان دهنده ی استافیلوکوکوس اورئوس است.
نتایج منفی باید با آزمایش لوله ای کوآگولاز تأیید شود.
روش انجام تست کواگولاز اسلایدی
- کلنی استافیلوکوک را در یک قطره آب روی یک لام شیشه ای تمیز و بدون چربی امولسیون کنید (اگر کلنی، سوسپانسیون صاف و شیری ایجاد نکند ، آزمایش را ادامه ندهید).
- سوسپانسیون های مشابهی از کنترل واکنش مثبت و منفی تهیه کنید تا واکنش مناسب پلاسما را تأیید کنید.
- به کمک یک سرنگ استریل یک قطره پلاسمای به دمای محیط رسیده را بر روی سوسپانسیون باکتری بریزید و این کار را برای کنترل مثبت و منفی تکرار کنید.
- در طول ۱۰ ثانیه، نتیجه ی مثبت با مشاهده ی آگلوتیناسیون های درشت قابل رویت است.
- نتایج منفی باید توسط تست لوله ای بررسی شوند.
آزمون اسلاید کوآگولاز روش اصلی است که برای شناسایی استافیلوکوکوس اوردوس در آزمایشگاه های بالینی است اما محدودیت هایی دارد.
- حدود 15٪ از سویه های معمولی S. aureus و بسیاری دیگر از MRSA واکنش های منفی ایجاد می کنند.
- تعداد کمی از استافیلوکوکهای کوآگولاز منفی، واکنش های مثبتی نشان می دهند.
بنابراین لازم است برای تایید نتیجه های نهایی از تست لوله ای استفاده شود که دقت بالا تری دارد.
تست کواگولاز لوله ای
- این تست، استافیلوکوآگولازی را که با فاکتور واکنش دهنده کواگولاز (CRF) واکنش می دهد، تشخیص می دهد. CRF یک مولکول شبه ترومبین است.
- استافیلوکوآگولاز و CRF با هم ترکیب می شوند و به طور غیرمستقیم فیبرینوژن را به فیبرین تبدیل می کنند.
- سوسپانسیون ارگانیسم در ۳۷ درجه سانتیگراد به حالت معلق درآمده و با پلاسما انکوبه می شود.
- تشکیل لخته در عرض ۴ ساعت، نشان دهنده آزمایش مثبت است.
- نتیجه مثبت آزمایش، نشان دهنده ی استافیلوکوکوس اورئوس است.
- برخی از گونه های استافیلوکوک کوآگولاز منفی نیز می توانند نتیجه ی مثبت داشته باشند.
- لوله های منفی باید یک شب در دمای اتاق نگه داشته شوند تا مجددا بررسی شوند.
برخی از گونه ها دارای آنزیمی هستند که می تواند باعث انحلال لخته پس از انکوباسیون طولانی مدت شود